線粒體dna不用試劑盒怎麽提取
提取線粒體dna方法：（僅供參考）
（1）Triton法： 取10的7次方細胞沈澱,懸浮於5ml的Triton溶解液中.溫和振蕩片刻後,室溫下放置10min.反應完畢的溶液以8000r/min離心1min,上清即為mtDNA.
（2）堿變性法： 取107細胞沈澱,依次加入溶液A(4℃)150Λl,冰浴中將沈澱吹打分散後加入300Λl溶液B(常溫),將Eppendrof管緩慢顛倒10次,冰浴裂解變性6～8min,再加入225Λl溶液C(0～4℃),輕柔混勻,冰浴復性20～25min.反應完畢的溶液以10000r?min離心6min,4℃,取上清.1.3.3改進高鹽沈澱法[3] 取107細胞沈澱,加入溶液?5500Λl,混勻,2000r/min,10min,棄上清.沈澱加溶液?5500Λl,混勻,3500r/min,10min,棄上清.沈澱加溶液?950Λl,混勻後加入20mg/ml蛋白酶K50Λl和10%SDS120Λl,快速混勻.40℃過夜或50℃4h.加入300Λl飽和醋酸鈉,混勻,輕搖15S.15000r/min,4℃,15min,取上清Eppendrof管中.取上清後步驟相同.上清中加入等體積酚∶氯仿∶異醇(25∶24∶1),溫和振蕩8min,10000r/min,10min4℃,取上層水相重復該過程抽提壹次,輕取上層水相.加入2倍體積冰乙醇或等體積異丙醇,冰浴30min,15000r/min,10min,棄上清.用70%冰乙醇漂洗沈澱,15000r?min,2min,徹底去上清.沈澱於空氣中自然部分幹燥25min,加入適量RTE液溶解.貯於4℃