当前位置 - 股票行情交易網 - 財經新聞 - 貼壁細胞怎樣進行傳代?

貼壁細胞怎樣進行傳代?

貼壁細胞細胞在培養瓶長成致密單層後,繼續生長的空間不足,培養基中的營養成份也消耗較多,同時代謝廢物也有較多堆積,需要分瓶培養,對細胞進行傳代擴增。

貼壁細胞傳代標準步驟:

壹、準備工作

1. 廢液缸

2. 吸管

3. 新鮮培養基

4. 消化液

5. 細胞洗滌液

6. 離心管

7. 油性記號筆/普通簽字筆

8. 實驗記錄本

二、實驗步驟

1. 打開層流,打開層流間和超凈臺的紫外線燈,離心管、廢液缸和吸管需同時照射;

2. 把水浴鍋調整到37℃ 並使其穩定;

3. 將消化液和新鮮培養基放置到水浴鍋中,註意防止水面高於瓶肩,10ml液體保持3分鐘,(100ml液體保持10分鐘, 200ml液體保持15分鐘,500ml液體保持20分鐘),間或搖動;

4. 著無菌服裝,帽子,口罩和手套

5. 用75%乙醇消毒培養基瓶外壁,放置到超凈臺上;

6. 將細胞培養瓶取出,用75%乙醇棉球消毒瓶底;

7. 用吸管吸棄舊培養基,更換吸管,於非細胞培養面加入等量細胞洗滌液,輕輕搖晃使其覆蓋整個瓶底,吸棄細胞洗滌液,更換吸管,重復洗滌壹次;

8. 加入少量細胞消化液,37℃鏡下觀察消化;

9. 當細胞明顯回縮後,加入少量新鮮細胞培養基終止消化,輕柔吹打底面2~3次後收集所有液體入新離心管中;

10. 1200轉/分鐘離心8分鐘,棄上清,細胞沈澱用適量新鮮培養基懸浮;

11. 加入到新培養瓶中,標記瓶號與細胞批次

12. 記錄實驗過程和細胞培養瓶號。