誘導幹細胞分化為脂肪細胞所用的培養基中有血清嗎
培養基的選擇:
細胞培養是實驗室裏最常見和最基本的實驗了,但卻不是最簡單的。別小看細胞培養,這裏可蘊含著大學問。有時候細胞狀態不好,轉染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細胞培養的因素很多,讓我們先從培養基和血清說起。
◆ MEM是由Eagle’s基礎培養基(BME)發展而來的,其中增加了組分的範圍及濃度。
◆ 改良的BEM(DMEM)培養基是為小鼠成纖維細胞設計的,現在常用於貼壁細胞的培養。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L,後來為了某些細胞的生長需要,將葡萄糖含量又調整為4500 mg/L,這就是大家常說的低糖和高糖了。
◆ aMEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸,它可廣泛應用於各種細胞類型,包括對營養成分要求苛刻的細胞。
◆ Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的,現在也廣泛應用於克隆形成率的分析及原代培養。F12還可以與DMEM等體積混合使用,得到壹種高濃度與成分多樣化相結合的產物,這種培養基已應用於許多原代培養及更難養的細胞系的培養。
◆ RPMI 1640培養基是專為淋巴細胞培養而設計的,現在已廣泛應用於懸浮細胞的培養。
準備幾種培養基,然後花大約兩周的時間做壹個簡單的細胞生長實驗,來選擇其中最適合的。
以前大部分實驗室都是用幹粉培養基,但配制過程就較為繁瑣,要溶解、調pH值,過濾,過程中可能會產生壹些濃度誤差,而且有些實驗室的水質並不理想,所以培養的效果會有差異。
血清的選擇:
血清含有生長因子可促進細胞的繁殖,含有附著因子可促進細胞的貼壁,同時還具有抗胰酶活性。血清同時也是礦物質、脂類及激素的來源。最常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和馬血清等。牛血清是按照采血時間的早晚來分類的。采血時間越早,營養物質越豐富,所含抗體也越少,因而胎牛血清適合要求高的細胞系和克隆化培養。
而血清批次間的差別就是不可避免的,這種差異來源於不同的制備方法和除菌方法、動物的年齡差別及血清的儲存條件等,而且與取血動物的來源關系密切。不同的牧場、不同的氣候天氣及其他環境因素都可能影響血清的質量。因此選好了壹種血清就要盡可能長期使用它。在需要更換時,也要盡量保持與原有的壹批血清相似。現在很多公司都提供血清預留,妳壹旦選定了某個批次的血清,最好備足壹年的量,這樣可以避免很多麻煩。
血清固然是細胞培養中不可或缺的成分,但血清的批間差異大,更換血清時需要做大量的測試以取保替換的血清與原來的相似。而血清的供應也是必須要考慮的因素。
無血清培養基(Serum-Free Media),通常以SFM表示,顧名思義,就是在細胞培養中不需要添加血清,但是在某些應用中可能要添加生長因子或細胞因子。無血清培養基中添加了血清的主要成分:粘附因子、生長因子、必需的營養物質和激素等,能減少上述血清帶來的不利因素,使細胞培養的條件更穩定。但它也不是完美的,從有血清培養過渡到無血清培養的條件並不像想象中那麽直截了當。處於發育的不同分化階段的細胞(例如幹細胞與定向前體細胞相比)需要不同的配方,對生長因子和細胞因子的選擇尤為重要。而且在去除血清的同時,也去除了壹些血清蛋白具有的保護、解毒作用,因此對試劑、水的純度和儀器清潔度的要求更高。另外,它的價格也比普通的培養基貴很多。
這麽多種,要選擇起來也是個頭疼的事情。除了部分培養基是公開配方的,如用於培養內皮細胞的MCDB 131(Sigma),大部分液體培養基都是專利配方的,也就是說其中的成分是保密的。那麽妳只能是檢索文獻、讓供應商推薦,然後用自己的細胞做幾次傳代培養來選出最合適的培養基。畢竟實踐出真知嘛。