T7RNA聚合酶結果不穩定
含有t7或sp6啟動子質粒只能在大腸桿菌菌株中發揮作用的原因：
T7啟動子是當今大腸桿菌表達系統的主流，這個功能強大兼專壹性高的啟動子經過巧妙的設計而成為原核表達的首選，尤其以Novagen公司的pET系統為傑出代表。
1、強大的T7啟動子完全專壹受控於T7 RNA聚合酶，而高活性的T7 RNA 聚合酶合成mRNA的速度比大腸桿菌RNA聚合酶快5倍——當二者同時存在時，宿主本身基因的轉錄競爭不過T7表達系統，幾乎所有的細胞資源都用於表達目的蛋白；
2、誘導表達後僅幾個小時目的蛋白通常可以占到細胞總蛋白的50%以上。由於大腸桿菌本身不含T7 RNA 聚合酶，需要將外源的T7 RNA 聚合酶引入宿主菌，因而T7 RNA 聚合酶的調控模式就決定了T7系統的調控模式——非誘導條件下，可以使目的基因完全處於沈默狀態而不轉錄，從而避免目的基因毒性對宿主細胞以及質粒穩定性的影響；
3、通過控制誘導條件控制T7 RNA 聚合酶的量，就可以控制產物表達量，某些情況下可以提高產物的可溶性部分。有幾種方案可用於調控T7 RNA 聚合酶的合成，從而調控T7表達系統。