雙縮脲反應原理是什麽?
雙縮脲試劑檢測蛋白質原理是雙縮脲在堿性溶液中能與硫酸銅反應產生紅紫色絡合物,此反應稱為雙縮脲反應。
蛋白質分子中含有很多和雙縮脲結構相似的肽鍵,因此也能起雙縮脲反應,形成紅紫色絡合物。
雙縮脲試劑本是用來檢測雙縮脲,由於蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此也能與銅離子在堿性溶液中發生雙縮脲反應。當底物中含有肽鍵時,試液中的銅與多肽配位,絡合物呈紫色。可通過比色法分析濃度。
雙縮脲法測定蛋白質的優缺點:
優點:雙縮脲法測定蛋白質的測定範圍是1~10mg蛋白質,操作簡單、快捷。既適合手工操作,又適合自動化分析,重復性好、線性關系好,雙縮脲試劑可以長期保存。
缺點:靈敏度差,測定範圍窄,樣品需要量大,不同的蛋白質產生顏色的深淺相近,因此它常用於需要快速,但並不需要十分精確的蛋白質測定。
幹擾測定的物質包括有:在性質上是氨基酸或肽的緩沖液,如TrIs緩沖液,因為它們產生陽性呈色反應,銅離子也容易被還原,有時出現紅色沈澱。