什麽是sds-page凝膠電泳?
sds-page凝膠電泳原理是根據檢體中蛋白質分子量大小的不同,使其在電泳膠中分離。SDS是陰離子去汙劑,作為變性劑和助溶試劑,它能斷裂分子內和分子間的氫鍵,使分子去折疊,破壞蛋白分子的二、三級結構。
而強還原劑如巰基乙醇,二硫蘇糖醇能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS後,分子被解聚成多肽鏈,解聚後的氨基酸側鏈和SDS結合成蛋白-SDS膠束,所帶的負電荷大大超過了蛋白原有的電荷量,這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結構差異。
sds-page凝膠電泳作用
濃縮膠的作用是有堆積作用,凝膠濃度較小,孔徑較大,把較稀的樣品加在濃縮膠上,經過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至壹個狹窄的區帶。
當樣品液和濃縮膠選Tris/HCl緩沖液,電極液選Tris/甘氨酸。電泳開始後,HCl解離成氯離子,甘氨酸解離出少量的甘氨酸根離子。蛋白質帶負電荷,因此壹起向正極移動,其中氯離子最快,甘氨酸根離子最慢,蛋白居中。
電泳開始時氯離子泳動率最大,超過蛋白,因此在後面形成低電導區,而電場強度與低電導區成反比,因而產生較高的電場強度,使蛋白和甘氨酸根離子迅速移動,形成壹穩定的界面,使蛋白聚集在移動界面附近,濃縮成壹中間層。