怎樣配制母液和培養基?
配制培養基是花卉組織培養的首要環節。培養基的成分隨著花卉的種類、不同的外植體、不同的培養階段應當有所不同。壹般來說,各種培養基都有大量元素、微量元素、維生素、激素、糖和瓊脂等物質,有時還要在培養基裏添加有機附加物,如活性炭、香蕉汁、椰子汁等。在生產上,首先選用已有的培養基配方,它是前人研究的成果,又是經過生產實踐驗證的。現在幾乎各種花卉用的營養基配方都有,可以免去您再研究的麻煩,當然在生產實踐中,也可適當改進。如果您找不到合適的配方,可先試用MS培養基,MS是Murashige和Skoog的縮寫,他們二人於1962年研究出來了這種培養基。下面以MS培養基為例,介紹怎樣配制。
(1)配制母液。把培養基中的必需元素按原配方量的50倍、100倍或1 000倍稱量後制成壹種濃溶液,這種濃溶液叫母液。在配制培養基時按比例分別量取母液稀釋到所需的濃度即可。母液配好後貼上標簽,放在0~4℃的冰箱中,可使用半年到1年,這樣做可節省許多時間。可能產生化學反應的或溶解後產生沈澱的,不能放在同壹個容器中。配制母液要用重蒸餾水。藥物要使用分析純或等級較高的化學純。藥物的稱量和藥液的定容都要準確。母液①:硫酸鎂18.5克,硝酸銨82.5克,硝酸鉀95.0克。加水定容到1000毫升,濃度為培養基的50倍,配1升培養基時量取20毫升母液。母液②:氯化鈣22.0克。加水定容到500毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液。母液③:磷酸二氫鉀8.5克。加水定容到500毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液。母液④:乙二胺四乙酸二鈉3.73克,硫酸亞鐵2.78克。加水定容到1000毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液。母液⑤:硼酸620毫克,硫酸錳2230毫克,硫酸鋅860毫克,硫酸銅2.5毫克,碘化鉀83毫克,鉬酸鈉25毫克,氯化鈷2.5毫克。加水定容到1000毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液。母液⑥:肌醇5克,甘氨酸100毫克,煙酸25毫克,鹽酸吡哆醇25毫克,鹽酸硫胺素5毫克。加水定容到500毫升,濃度為培養基的100倍,配1升培養基時量取10毫升母液。
(2)配制培養基。配制每1000毫升培養基,稱取6~10克瓊脂作凝固劑,具體按配方要求稱量,放在水浴鍋上慢慢溶解。先在量筒內放入壹定量的水,按照母液順序和規定量,量取母液。當母液加完後,根據需要每升培養基再加入生長調節物質如吲哚乙酸或萘乙酸等,細胞分裂素類0.04~10毫克,細胞分裂素應用最多的是6-芐基腺嘌呤,加完後倒入已熔化的瓊脂中。每1000毫升培養基加入蔗糖30克或根據要求確定,定容到所需的體積。繼續加溫,直到瓊脂完全熔解。用鹽酸或氫氧化鈉對培養基的pH進行調節,多數培養基的pH在5.4~6.0之間,MS培養基的pH為5.7。將配好的培養基趁熱倒入培養容器中,培養基占容器體積的1/3~1/4。不要將培養基沾到容器壁上,否則容易被雜菌感染。然後及時加蓋,進行高壓滅菌,滅菌時要按高壓滅菌鍋的操作規程使用。在121℃、壓力111千帕下維持15~20分鐘,溫度和時間都要嚴格控制。到時間後立即切斷電源,當高壓鍋內壓力降到常壓後,開啟放氣閥,打開鍋蓋,取出滅菌好的培養基,放在接種室中培養3天,沒被感染後才能用來組織培養。