用tcbs培養基能不能直接進行弧菌計數
弧菌數量—平板計數法
培養基
—— 計數培養基BTB:牛肉膏3.0g, 蛋白腖10.0g,蔗糖15.0g,氯化鈉20.0g,Teepol 1.0g, 溴麝香草酚藍0.06mg,蒸餾水1000mL。配制方法:將上述數量的牛肉膏、蛋白腖、蔗糖、氯化鈉和Teepol加熱溶解於1000mL蒸餾水中, 用16%的氫氧化鈉調整pH為7.8,再將溴麝香草酚藍按上述量溶解其中。分裝於試管(每管5mL)中,塞棉塞,包裝後於115℃高壓蒸氣滅菌20min, 然後於冰箱中冷藏備用。
—— 平板分離培養基TCBS:蛋白腖10.0g, 酵母膏5.0g,檸檬酸鈉10.0g,硫代硫酸鈉10.0g, 蔗糖20.0g,膽鹽8.0g, 氯化鈉10.0g,檸檬酸鐵1.0g, 溴麝香草酚藍0.04g,麝香草酚藍0.04g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL。配制方法:將上述數量的蛋白腖、酵母膏、檸檬酸鈉、硫代硫酸鈉、蔗糖、膽鹽、氯化鈉、檸檬酸鐵、溴麝香草酚藍和麝香草酚藍加熱溶解於1000mL蒸餾水中,調節pH為8.6,在加熱至沸騰。然後冷卻至55℃, 傾註無菌培養皿即可。該培養基不需要高壓滅菌。
—— PAC斜面培養基:蛋白棟5.0g,酵母膏2.5g, 葡萄糖1.0g,氯化鈉10.0g, 瓊脂15.0g,蒸餾水1000mL。配制方法:將上述量蛋白棟、酵母膏、葡萄糖、氯化鈉和瓊脂加熱溶解於1000mL蒸餾水中, 調節pH為7.0,分裝於試管(每管5mL)中, 塞棉塞,包裝後於高壓蒸汽滅菌鍋中115℃滅菌20min。滅菌後立即取出裝有上述培養基的試管,傾斜放置於實驗臺面上,使其冷卻後培養基在試管內形成斜面。放置冰箱中冷藏備用。
—— 弧菌的分離和計數:采用9管“MPN”法以3個不同稀釋度(原水樣、10-1和10-2)的水樣接種於BTB培養液的試管中, 37℃培養18h, 把陽性管中的菌液於TCBS平板上劃線分離, 平板放進培養箱裏, 於37℃培養18h,將出現的綠色、藍綠色和黃色菌種接種於PCA斜面上保存。分離菌株首先經革蘭氏染色、氧化酶、運動性和0/129弧菌素敏感實驗等,符合弧菌特征的菌株,視其來源的“MPN”管數, 查“MPN”表進行計數。