3C,4C,5C以及HiC測序技術都有些什麽不同?
3C技術最早是2002年Deker提出來的,目的是捕獲染色體的interaction,基本假設是,染色體中的interaction是以蛋白為介導的。那麽通過限制酶酶切,補平,連接,打斷,PCR後,如果染色體A,B兩點就相互作用,根據這兩點特意序列的引物就能PCR出產物,也就驗證了是有interaction的。但是可惜,每1對位點的驗證就需要設計1對特異性引物,很麻煩。
總結起來,就是3C,可以驗證1個點與1個點的相互作用,每1對相互作用需要1對引物。4C 因為3C過於麻煩,所以後來人們設計了雙酶切位點,然後通過成環的形式,保證了只需要設計1對引物,就可以檢測1個位點對多個位點的相互作用,這就是4C,這個多出來的C是circle的意思。 總結起來,4C技術,可以驗證1個點與多個點的相互作用,因為根據這1個點設計,關鍵步驟是成環。5C技術是在4C的技術上,加了個tag標簽,導致可以檢測many-to-many的相互作用。沒啥說的。 Hi-C的基本步驟是,甲醛交聯,限制酶切,末端補平加biotin,平末端連接,超聲破碎,biotin富集,建庫測序。整個過程是沒有特異性引物存在的。而且依靠高通量的測序技術,Hi-C可以展現出,整個染色體all-to-all的互作關系。 總結起來,Hi-C,獲得all-to-all的互作關系。 ChIA-PET 如果關心Hi-C技術,就壹定會關註到ChIA-PET技術,這個技術是用特異性抗體富集interaction信息。比如CTCF,比如pol II的抗體,然後類似的步驟,建庫測序。ChIA-PET的數據應該是Hi-C數據的壹個子集。Capture-C,DNase-C等等,都是壹些Hi-C的衍生技術。