PCR擴增目的基因以後,怎麽用瓊脂糖電泳回收及純化呢?希望高手指教!
可以用回收試劑盒。舉例如下:
DNA的回收使用AXYGEN公司AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒,回收步驟如下:
1、 在紫外燈下切下含有目的DNA的瓊脂糖凝膠,用紙巾吸盡凝膠表面液體並切碎。計算凝膠重量(提前記錄1.5 ml離心管重量),該重量作為壹個凝膠體積(如100 mg=100 μl體積);
2、 加入3個凝膠體積的Buffer DE-A,混合均勻後於75 ℃加熱,,間斷混合(每2-3 min),直至凝膠塊完全融化(約6-8 min);
3、 加0.5個Buffer DE-B,混合均勻;
4、 吸取步驟3中混合液,轉移到DNA制備管(置於2 ml( 試劑盒內提供)離心管)中,12,000×g離心1 min,棄濾液;
5、 將制備管置回2 ml離心管,加500 μlBuffer W1,12,000×g離心30 s,棄濾液;
6、 將制備管置回2 ml離心管,加500 μlBuffer W2,12,000×g離心30 s,棄濾液,用同樣的方法再用700 μl Buffer W2洗滌壹次12,000×g離心1 min;
7、 將制備管置回2 ml離心管,12,000×g離心1 min;
8、 將制備管置於潔凈的1.5 ml離心管(試劑盒內提供)中,在制備膜中央加25-30 μlEluent,室溫靜置1 min,12,000×g離心1 min洗脫DNA。
如果片段較大,如幾千kb以上建議用promega公司的回收試劑盒這樣效果較好。
具體的步驟什麽的回收試劑盒裏均有說明書。