探針有哪些類型?探針標記有哪些方法
探針有DNA探針和寡核苷酸探針。
探針標記方法有:隨機引物標記、切口平移法、末端標記法。
切口平移是切口產生3'羥基和5'磷酸基團,DNA延伸合成3'端,5'端被小片段降解,缺口位點沿著雙鏈向3'端移動,是在體外向DNA分子引入放射性標記核苷酸的技術。
隨機引物合成是使寡核苷酸引物與DNA模板結合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探針。
末端標記法通過末端脫氧核糖核苷酸轉移酶催化標記的dNTP加到單鏈或雙鏈DNA的3,末端上。
探針合成的註意事項
①合成探針的長短,壹般在20~50個核苷酸之間。合成過長成本高,且易出現聚合酶合成錯誤,雜交時間長,合成太短則特異性下降。
②堿基組成G-C應含40%~60%,壹種堿基連續重復不超過4個,以免非特異性雜交產生。
③探針自身序列內應無互補區域,以免產生“發夾”結構,影響雜交。
總之,壹個好的探針最終要在實踐中才能加以確認。