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色譜柱各參數有什麽意義

意義:聚合物基質多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,化學穩定,應用pH範圍寬,具有更強的疏水性,對蛋白質等樣品分離效果較好;但強度較小,有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損,批次重復性較差,商品化色譜柱不多,壹般價格較貴。

壹、液相色譜柱物理性質參數

1、柱長,內徑

如250*4.6mm。壹般柱長在2—250mm,柱越長,分離度越高,但柱壓更高,分離所需時間更長;但分離度與理論塔板數的平方根成正比,所以壹昧增加柱長並不是最有效的分離手段,壹般情況下,150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數。

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2、粒徑

粒徑影響色譜分離度。粒徑越小,分離越快,柱效越高,但柱壓力越高,柱容易被汙染,導致柱壽命降低。常見分析柱通常使用5um填料,復雜的多組分樣品分離壹般使用3.5um粒徑,更大內徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑。如果固定相選擇是正確,但是分離度不夠,那麽選用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍,因此如何選擇填料粒徑需要根據現實情況而定。

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3、孔徑 

孔徑,60A,120A,300A等。孔徑小,則含孔率高,比表面積大,載碳量高;色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配,保證分子自由進出填料孔並與孔內表面的鍵合相進行分離分配,通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上,壹般小分子使用80—120A,大分子使用300A。