如何提取馬芷莧的有效成分的方法
1.1 儀器與試劑
LAMBDA 35 型紫外分光光度計,Heraeus 烘箱,Philips Comfort粉碎機,SORVALL Evolution RC型離心機,磁力攪拌器(SI VORTEX),通風櫥,安捷倫6820型氣相色譜、旋轉蒸發儀(RE-52AA)。
石油醚,氫氧化鉀,無水乙醇,尿素,10%硫酸,氨水,無水乙醇,氯仿均為國產分析純。
1.2 材料馬齒莧采自江西南昌壹帶,將其於烘箱中在60℃烘幹至恒重,粉碎,密封備用。
1.3 步驟
1.3.1 馬齒莧多糖的提取葡萄糖標準曲線的制作:蒽酮硫酸法測定糖含量,標準曲線方程:Y=0.584 3X+0.010 3(R2=0.997 1)。
馬齒莧多糖的提取和測定〔8〕:準確稱取馬齒莧粉末100 g,按照1:30(W:V)加入蒸餾水,水煎煮3次(1.5,1.0,0.5 h),過濾,合並3次提取液,濃縮提取液,冷卻後4 000 r/min離心15 min,取上清,以無水乙醇調制終濃度為75%,4℃靜置過夜,沈澱物再分別以無水乙醇、丙酮、乙醚回流洗滌,得灰白色粗多糖粉末,以適量蒸餾水溶解粉末,置4℃冰箱備用。
1.3.2 馬齒莧多不飽和脂肪酸的提取亞麻酸甲酯標準曲線的制作:利用安捷倫6820型氣相色譜制作標準曲線,采取標準品內標法。氣相色譜條件:前進樣口溫度220℃,前檢測器溫度300℃,後檢測器溫度275℃,柱溫150℃保持時間1 min,以15℃/min升溫至200℃,以2℃/min升溫至250℃,保持5 min。載氣(N2)20ml/min,輔助氣(H2)30 ml/min,空氣(助燃氣)350 ml/min,進樣量1μl。標準曲線方程:Y=2 196.9X+1 305.4(R2=0.981 6)。
馬齒莧不飽和脂肪酸的提取和測定〔9,10〕:稱取馬齒莧幹粉100 g,按1∶4的體積比例加入400 ml石油醚,室溫攪拌2 h,4 000 r/min,4℃離心15 min,取上清液,揮發盡石油醚,得黏稠狀褐色油狀物,稱重,稱取1/4倍於油狀物的KOH,以3∶80(W/V)的比例溶於無水乙醇中。加至油狀物中,攪拌,皂化反應45 min。再在4℃反應60 min。過濾,得透明溶液,濃縮回收乙醇,使乙醇含量不大於50%。加入等體積的蒸餾水,用濃鹽酸調至出現分層(pH 2.0左右)為止,取上層油相。70℃水浴制備含有壹定比例(20%)尿素的乙醇溶液。按2.4倍濾液體積的比例加入油相中,70℃水浴攪拌使溶液呈均勻的透明相。置4℃冰箱放置6h,過濾或離心除去包合物,濃縮回收乙醇。加入4倍於油狀物的蒸餾水稀釋,用1/3倍體積的氯仿萃取3次,揮發氯仿,得濃縮的多不飽和脂肪酸。
1.3.3 馬齒莧生物堿的提取〔11〕稱取100 g馬齒莧粉末,加500 ml無水乙醇,40℃攪拌1 h。過濾,收集濾液,濾渣中加300 ml的無水乙醇,40℃攪拌1.5 h。過濾,收集濾液,濾渣中加300 ml的無水乙醇,40℃攪拌30 min。過濾,收集濾液,合並以上3次濾液。置旋轉蒸發儀中揮發盡乙醇,出現黑色浸膏。在浸膏中加50 ml 10%的硫酸溶解,過濾。用氨水調pH至10.0,加入10ml 飽和NaCl(36 g NaCl / 100 g)水溶液。用1/5倍體積於原溶液的氯仿萃取5次,置通風廚中將氯仿揮發盡,10%乙醇溶解。