pcr擴增中,如何設計引物?

1、引物5撇端可以修飾。引物3撇端不可修飾。引物3撇端要避開密碼子的第3位。

2、引物設計需要註意的地方很多，在大多數情況下，我們都是在知道已知模板序列時進行PCR擴增的。設計的目的是在兩個目標間取得平衡：擴增特異性和擴增效率。

3、PCR引物設計的11條黃金法則引物最好在模板cDNA的保守區內設計。DNA序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。

4、可以使用oligo6或者primer5等軟件設計。用這些軟件選擇引物，主要就是看引物的穩定性，形成二聚體的可能性，退火溫度等等參數。如果妳的序列同源性不高，GC含量也還可以的話，可以使用壹些經驗性原則。

5、PCR的技術的主要步驟及PCR引物設計的壹般原則分述如下：PCR的技術的主要步驟：DNA變性：（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。