蛋白質用什麽試劑檢測? 謝謝!
蛋白質用雙縮脲試劑檢測。
雙縮脲試劑是壹個用於鑒定蛋白質的分析化學試劑。它是壹個堿性的含銅試液,呈藍色,由0.1g/mL氫氧化鈉或氫氧化鉀、0.01g/mL硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制。會遇到蛋白質顯紫色。
雙縮脲試劑本是用來檢測雙縮脲,由於蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此也能與銅離子在堿性溶液中發生雙縮脲反應。當底物中含有肽鍵時(多肽),試液中的銅與多肽配位,絡合物呈紫色。可通過比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。
雙縮脲試劑中真正起作用的是硫酸銅,而氫氧化鉀僅僅是為了提供堿性環境,因此它可被其他堿,如氫氧化鈉所代替。向試劑中加入碘化鉀,會延長試劑的使用壽命。酒石酸鉀鈉的作用是保護反應生成的絡離子不被析出變為沈澱,從而使試劑失效。
擴展資料
註意事項
在使用雙縮脲試劑時候,必須註意,必須是先加0.1 g/mL氫氧化鈉溶液,再加0.01 g/mL硫酸銅的水溶液。若先加入硫酸銅溶液,再加入氫氧化鈉溶液,則無法充分制造堿性環境,此時CuSO4會與NaOH發生復分解反應,生成藍色氫氧化銅沈澱,導致現象不清,無法較好地達到實驗目的。
配置方法
雙縮脲試劑A是質量分數為0.1 g/mL的NaOH水溶液;
雙縮脲試劑B是質量分數為0.01 g/mL的CuSO4水溶液。
先在待測液中加入雙縮脲試劑A 3mL,振蕩均勻(營造堿性環境),再加入1~2滴雙縮脲試劑B,振蕩均勻。如果待測液裏含有蛋白質,那麽會看到溶液變成紫色。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應。
蛋白質的肽鍵在堿性溶液中能與Cu2+絡合成紫色的絡合物。顏色深淺與蛋白質濃度成正比。
百度百科-雙縮脲試劑