分光光度計的工作原理?
分光光度計就是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器.
而分光光度法則是通過測定被測物質在特定波長處或壹定波長範圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析.常用的波長範圍為：(1)200～400nm的紫外光區,(2)400～760nm的可見光區,(3)2.25μm（按波數計為4000cm～400cm）的紅外光區.所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計.為保證測量的精密度和準確度,所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定,定期進行校正檢定.單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比,其關系如下式：1 A=log — =ECL T 式中 A 為吸收度； T 為透光率； E 為吸收系數,采用的表示方法是(E1％ 1cm),即吸收度換算成溶液濃度為1％(g/ml),液層厚度為1cm的數值； C 為100ml溶液中所含被測物質的重量,g(按幹燥品或無水物計算）； L 為液層厚度 ,cm.物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該物質的物理常數.當已知某純物質在壹定條件下的吸收系數後,可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量.在可見光區,除某些物質對光有吸收外,很多物質本身並沒有吸收,但可在壹定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色後再測定,故又稱比色分析.由於顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標準品或對照品同時操作.
分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器.常用於核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量.
分光光度計的簡單原理
分光光度計計采用壹個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光源透過測試的樣品後,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度.樣品的吸光值與樣品的濃度成正比.