ELISA實驗中什麽叫封閉

封閉 (blocking)是繼包被之後用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。抗原或抗體包被時所用的濃度較低，吸收後固相載體表面尚有未被占據的空隙，封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥在ELISA 其後的步驟中幹擾物質的再吸附。封閉的手續與包被相類似。最常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是壹種良好的封閉劑，其最大的特點是價廉，可以高濃度使用(5%)。高質量的速溶食用低脂奶粉即可直接當作封閉劑使用，但由於奶粉的成份復雜，而且封閉後的載體不易長期保存，因此在試劑盒的制備中較少應用。封閉是否必要，取決於 ELISA 的模式及具體的實驗條件。並非所有的ELISA 固相均需封閉，封閉不當反而會使陰性本底增高。壹般說來，雙抗體夾心法，只要酶標記物是高活性的，操作時洗滌徹底，不經封閉也可得到滿意的結果。特別是用單抗腹水直接包被時，因其中大量非抗體蛋白在包被時同樣也吸附在固相表面，業已起到了類似封閉劑的作用。但在間接法測定中，封閉壹般是不可少的(見2.2.2)。包被好的E LISA 板幹燥後放入密封袋或錫袋中，在低溫可保存數月。