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全血基因組DNA提取試劑盒的作用原理是怎樣的

保證核酸壹級結構的完整性,核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子,其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的汙染應降低到最低程度,其他核酸分子,如RNA,也應盡量去除。

全血基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)作用原來具體是這樣的:獨特的結合液,蛋白酶K迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸酶,然後基因組DNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附於離心柱內矽基質膜。

再通過壹系列快速的漂洗,離心的步驟,抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物,蛋白等雜質去除,最後低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從矽基質膜上洗脫。試劑盒特點:不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沈澱等步驟。

快速。簡捷。單個樣品操作壹般可在20分鐘內完成。多次柱漂洗確保高純度。典型的產量200μl全血可提取出3-6μg。純度達1.1.9,長度可達30Kb-50kb。可直接用於PCR,Southern-blot和各種酶切反應。

擴展資料:

酚抽提法:先用蛋酶K,SDS破碎細胞,消化蛋白,然後用酚和酚-氯萃取,高速離心後取上清,所得DNA大小為100-150kb。

甲酰胺解聚法:破碎細胞同上,然後用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。

玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪於乙醇上,然後用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沈澱液繞於玻棒。生成DNA約80kb。

異丙醇沈澱法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態)。

表面活性劑快速制備法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然後用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沈澱或透析。

加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然後離心後取上清,可用於PCR反應。

堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心後取上清,含少量DNA。

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