堿性磷酸酶有哪些作用?
分子克隆中使用的堿性磷酸酶(alkaline:phosphatase)主要來源於牛小腸堿性磷酸酶(Calf:intestinal:alkaline:phosphatase),簡稱CIP或CIAP,也有來自細菌的堿性磷酸酶(Bacterial:alkaline:phosphatase,BAP)和蝦的堿性磷酸酶(Shrimp:alkaline:phosphatase,SAP),它們均能催化除去DNA或RNA5′-P的反應。通過去除5′-P,可用於防止DNA片段自身連接,或標記(5′端)前除去DNA或RNA5′-P。CIAP可用蛋白酶K消化滅活,或75攝氏度處理10:min,然後用酚氯仿抽提,純化去磷酸化的DNA,從而去除CIAP的活性。與CIAP不同,SAP在65攝氏度處理15:min後不可逆地失去活性,因此在去除殘留的酶活性方面SAP更有優勢。