rna稀釋後可以震蕩混勻嗎

可以。

1、準備工作

_ 玻璃勻漿器、75_乙醇預冷 ，離心機預冷至4℃ 打開超凈工作臺紫外燈15分鐘以上

_ 用酒精擦拭臺面 EP管標記

2、勻漿處理

1）取壹定量的純化過的孢子懸浮液，12000rpm ，離心5min，棄上清

_ 或者用勻漿儀進行勻漿處理，懸浮液不經離心，直接加0.5ml Trizol reagent於冰上充分勻漿懸浮液樣品體積壹般不要超過Trizol體積的10%.，然後再加入0.5ml Trizol 沖洗勻漿器，轉移至1.5ml EP管中

_ 直接在懸浮液中加入Trizol裂解細胞，加1ml Trizol.用取樣器吹打幾次.（離心取細胞，每5-10×106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml Trizol。加Trizol前不要洗滌細胞，以免降解mRNA。壹些酵母和細菌細胞可能需要勻漿儀處理）

2）1ml Trizol Reagent，震蕩混勻

3）將勻漿樣品在15-30℃放置5mim，使得核酸蛋白復合物完全分離。

4）可選步驟:4 ℃ 12 000rpm離心10min，取上清。

_綣分瀉薪隙嗟鞍住⒅盡⒍嗵腔蚣∪狻⒅參鍀嶠誆糠值齲衫胄娜コ＠胄牡玫降某戀碇邪ㄏ赴餑ぁ⒍嗵恰⒏叻腫恿_NA，上清中含有RNA。處理脂肪組織樣品時，上層是大量油脂，應除去。取澄清的勻漿溶液進行下壹步操作。

5）每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿，蓋好管蓋，在漩渦振蕩器上震蕩15s，室溫放置3min。如不能渦旋混勻，可手動顛倒混勻2min代替。

6）4 ℃ 12 000rpm，離心10-15min，樣品會分成三層：紅色的有機相，中間層和上層無色的水相，RNA主要在水相中，把水相（約600ul，約為所用Trizol試劑的60%）轉移到新管中。（如要分離蛋白質和DNA，可保留黃色的有機相）

7）在得到的水相溶液中加入等體積（500ul）的異丙醇，上下顛倒混勻，-20℃ 放置20-30min。

_ㄖ參鍩蚨鎰櫓_NA提取中，容易沈澱出大量的蛋白等汙染物，導致電泳檢測時看不到RNA。可以按以下步驟操作減輕汙染：在上清中加入1/2體積的異丙醇，1/2體積的RNA助沈劑，然後進行以下操作。）

8）4 ℃ 12 000rpm離心10min，去上清。

_ɡ胄那_NA沈澱經常是看不見的，離心後在管側和管底形成膠狀沈澱。）

9）加入1ml 75%乙醇（DEPC水處理過的水配制）洗滌沈澱。加入後把管子敲壹敲，盡量使RNA沈澱飄起來，每使用1ml Trizol至少加1ml乙醇。有時，為避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗滌之後可以晾幹或者烤幹乙醇，但是不能過於幹燥，否則不易溶解。

10）4 ℃ 12 000rpm離心5min，棄上清；短暫快速離心，用移液器小心吸棄上清，註意不要吸棄沈澱。

11）室溫放置晾幹（不要晾得過幹，RNA完全幹燥後會很難溶解，大約晾幹2-3min左右即可）。加入適量DEPC水（根據實驗需要，可加30-100ul水）或0.5%SDS，用槍頭吸打幾次，充分溶解RNA。50度保溫1小時。如RNA用於酶切反應，勿使用SDS溶液。RNA也可用100_ 的去離子甲酰胺。溶解，-70℃保存。可以分裝保存，防止汙染，

12）取1ul+1ul buffer 電泳檢測RNA完整性，稀釋壹定倍數，分光光度計測定純度和濃度。