EB是指酸性還是堿性
EB(Ethidium bromide,溴化乙錠)是堿性的。溴化乙錠是壹種高度靈敏的熒光染色劑,用於觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。溴化乙錠用標準302nm 紫外光透射儀激發並放射出橙紅色信號,可用Polaroid 底片或帶CCD 成像頭的凝膠成像處理系統拍攝。
觀察瓊脂糖凝膠中DNA最常用的方法是利用熒光染料溴化乙錠進行染色,溴化乙錠含有壹個可以嵌入DNA堆積堿基之間的壹個三環平面基團,它與DNA的結合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強度的飽和溶液中,大約每2.5個堿基插入壹個溴化乙錠分子。當染料分子插入後,其平面基團與螺旋的軸線垂直並通過範德華力與上下堿基相互作用。這個基團的固定位置及其與堿基的密切接近,導致與DNA結合的染料呈現熒光,其熒光產率比遊離溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm處的紫外輻射並傳遞給染料,而被結合的染料本身吸收302nm和366nm的光輻射。這兩種情況下,被吸收的能量在可見光譜紅橙區的590nm處重新發射出來。由於溴化乙錠-DNA復合物的熒光產率比沒有結合DNA的染料高出20-30倍,所以當凝膠中含有遊離的溴化乙錠(0.5ug/ml)時,可以檢測到少至10ng的DNA條帶。
由於在該染料存在的情況下,線狀DNA的電泳遷移率約降低15%,因此,當需要知道DNA片段的準確大小(如DNA限制酶酶切圖譜的鑒定)時,凝膠應該在無EB情況下電泳,電泳結束後用EB染色。染色完畢後,通常不需要脫色。但是在檢測小量DNA(小於10ng)片段時,通常要將染色後的凝膠進行脫色。
溴化乙錠可以用來檢測單鏈或雙鏈核酸(DNA或RNA)。但是染料對單鏈核酸的親和力相對較小,所以其熒光產率也相對較低。事實上,大多數對單鏈DNA或RNA染色的熒光是通過染料結合到分子內形成較短的鏈內螺旋產生的。