請教:細胞培養瓶及培養基的選擇
培養瓶的選擇:
細胞培養板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養孔的孔數有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根據材質的不同有Terasaki板和普通細胞培養板。具體選擇時根據培養細胞的類型、所需培養體積及不同的實驗目的而定。
(1)平底和圓底(U型和V型)培養板的區別和選擇
不同形狀的培養板有不同用途。培養細胞,通常是選用平底的,這樣便於鏡下觀測、有明確的底面積、細胞培養液面高度相對壹致。因此做MTT等實驗時,無論是貼壁和懸浮細胞,壹般選用平底板。測吸光值壹定要使用平底的培養板。要特別註意材質, 標示"Tissue Culture (TC) Treated"是養細胞用的。
U型或V型板,壹般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學方面,當做兩種不同淋巴細胞混合培養時,需要二者相互接觸刺激,這時壹般會選用U型板,因為細胞會由於重力的作用而聚集在很小的範圍內內。圓底培養板還會用於同位素摻入的實驗,需要用細胞收集儀收集細胞的培養,如"混合淋巴細胞培養"等。V型板常用做細胞殺傷、免疫學血凝集實驗。細胞殺傷這種實驗也可用U型板替代(加入細胞後,低速離心)。
(2)Terasaki板和普通細胞培養板的區別
Terasaki plate主要是用於晶體學研究,產品設計便於對晶體的觀察與結構分析。有兩種sitting 和handing drop兩種方法,兩種方法應用產品的外形結構也不同。材料上選擇crystal class polymer ,特殊的材料有利觀察晶體結構。
細胞培養板主要是PS材料,材料是treated sufface,便於細胞貼壁生長與伸展。當然還有浮遊細胞的生長材料,同時還有low binding surface
(3)細胞培養板與酶標板的區別
酶標板壹般要比細胞培養板貴,細胞板主要做細胞培養,也可以用來測蛋白濃度;酶標板包括包被板和反應板,壹般不用做細胞培養,它主要做免疫酶聯反應後的蛋白檢測,需要更高的要求和特定的酶標工作液。
(4)常用不同培養板的孔底面積及推薦加液量
不同孔板所加培養液的液面都不宜太深,壹般在2~3mm範圍,結合不同孔的底面積就可算出各培養孔的適宜加液量(參考下表)。若加液量過多會影響氣體(氧氣)交換,而且在搬動過程中易溢出造成汙染。具體所加細胞密度依實驗的目的不同靈活掌握。
培養基的選擇:
細胞培養是實驗室裏最常見和最基本的實驗了,但卻不是最簡單的。別小看細胞培養,這裏可蘊含著大學問。有時候細胞狀態不好,轉染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細胞培養的因素很多,讓我們先從培養基和血清說起。
◆ MEM是由Eagle’s基礎培養基(BME)發展而來的,其中增加了組分的範圍及濃度。
◆ 改良的BEM(DMEM)培養基是為小鼠成纖維細胞設計的,現在常用於貼壁細胞的培養。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L,後來為了某些細胞的生長需要,將葡萄糖含量又調整為4500 mg/L,這就是大家常說的低糖和高糖了。
◆ aMEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸,它可廣泛應用於各種細胞類型,包括對營養成分要求苛刻的細胞。
◆ Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的,現在也廣泛應用於克隆形成率的分析及原代培養。F12還可以與DMEM等體積混合使用,得到壹種高濃度與成分多樣化相結合的產物,這種培養基已應用於許多原代培養及更難養的細胞系的培養。
◆ RPMI 1640培養基是專為淋巴細胞培養而設計的,現在已廣泛應用於懸浮細胞的培養。
準備幾種培養基,然後花大約兩周的時間做壹個簡單的細胞生長實驗,來選擇其中最適合的。
以前大部分實驗室都是用幹粉培養基,但配制過程就較為繁瑣,要溶解、調pH值,過濾,過程中可能會產生壹些濃度誤差,而且有些實驗室的水質並不理想,所以培養的效果會有差異。