凝膠過濾層析的原理是什麽?
基本原理:凝膠過濾層析也稱分子篩層析、排阻層析。是利用具有網狀結構的凝膠的分子篩作用,根據被分離物質的分子大小不同來進行分離。
層析柱中的填料是某些惰性的多孔網狀結構物質,多是交聯的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質,小分子物質能進入其內部,流下時路程較長,而大分子物質卻被排除在外部,下來的路程短,當壹混合溶液通過凝膠過濾層析柱時,溶液中的物質就按不同分子量篩分開了。
凝膠層析的特點:
1)凝膠層析操作簡便,所需設備簡單。有時只要有壹根層析柱便可進行工作。分離介質——凝膠完全不需要像離子交換劑那樣復雜的再生過程便可重復使用。
2)分離效果較好,重復性高。最突出的是樣品回收率高,接近100%。
3)分離條件緩和。凝膠骨架親水,分離過程又不涉及化學鍵的變化,所以對分離物的活性沒有不良影響。
4)應用廣泛。適用於各種生化物質,如肽類、激素、蛋白質、多糖、核酸的分離純化、脫鹽、濃縮以及分析測定等。分離的分子量範圍也很寬,如Sephadex G類為102-105 D;Sepharose類為105-108 D。
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