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核酸提取純化方法

核酸提取純化方法如下:

1.電泳法:利用電泳技術將核酸從混合物中分離出來,再用某種方法將它從電泳膠中分離出來,從而獲得純化的核酸。

2.離心分離此和法:利用離心力將核酸從混合液中分離出來,再用某種方法將它從離心液中分離出來,從而獲得純化的核酸。

3.水解法:利用酶將核酸水解成小分子片段,再用某種方法將它們分埋扒凱離出來,從而獲得純化的核酸。

4.矽膠柱法:將核酸溶液中的成分通過矽膠柱分離,從而獲得純化的核酸。

5.氯仿沈澱法:將核酸溶液中的成分用氯仿沈澱,從而獲得純化的核酸。

在提取核酸時,利用了核酸的什麽特性

核酸分離、純化原則:1.保持核酸分子壹級結構的完整彎喚性.因為遺傳信息全部儲存在壹級結構之中,核酸的—級結構還決定其高級結構的形式以及和其他生物大分子結合的方式。

2.分離核酸原則:1)溫度不要過高;2)控制pH值範圍(pH值5-9); 3)保持壹定離子強度; 4)減少物理因素對核酸的機械剪切力。

在核酸分離提取中最重要的是要防止核酸的生物降解,細胞內或外來的各種核酸酶能消化核酸鏈中的磷酸二酯鍵,破壞核酸壹級結構.所用器械和壹些試劑需高溫滅菌,提取緩沖液中需加核酸酶抑制劑。

常用的DNA酶抑制劑有1.金屬離子螯合劑:如EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二鈉)、8-羥基喹啉.2.陰離於型表面活性劑如SDS,該試劑除對核酸酶有抑制作用外,還能使蛋白質變性,並與變性蛋白結合成帶負電荷的復合物,該復合物在高鹽溶液中沈澱。

常用的RNA酶(RNAase)抑制劑有:1.皂土(bentonite )作用機制:皂土帶負電荷,能吸附RNase,使其失活.2. DEPC(二乙基焦碳酸鹽) (C2H5OCOOCOOC2H5)粘性液體,很強的核酸酶抑制劑.作用機制:與蛋白質中His結合使蛋白變性。