蛋白質檢測方法雙縮脲

蛋白質檢測方法雙縮脲具體如下可供參考：

壹、雙縮脲法

1、雙縮脲法是壹個用於鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是壹個堿性的含銅試液，呈藍色，由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制。當底物中含有肽鍵時（多肽），試液中的銅與多肽配位，配合物呈紫色。

2、可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。鑒定反應蛋白質單位1-10mg。雙縮脲反應產生的紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。

3、雙縮脲試劑中真正起作用的是硫酸銅，而氫氧化鉀僅僅是為了提供堿性環境，因此它可被其他堿，如氫氧化鈉所代替。向試劑中加入碘化鉀，可延長試劑的使用壽命。成分：氫氧化鉀、硫酸銅、酒石酸鉀鈉。

二、實驗原理

1、雙縮脲（NH2CONHCONH2）是兩個分子脲經180℃左右加熱，放出壹個分子氨後得到的產物。在強堿性溶液中，雙縮脲與二價銅離子形成紫色絡合物，稱為雙縮脲反應。凡具有兩個酰胺基或兩個直接連接的肽鍵，或能夠以壹個中間碳原子相連的肽鍵。

2、這類化合物都有雙縮脲反應。紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。幹擾這壹測定的物質主要有：硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等。

3、此法的優點是較快速，不同的蛋白質產生顏色的深淺相近，以及幹擾物質少。主要的缺點是靈敏度差，不適合微量蛋白的測定。